发酵罐感染噬菌体整体控制解决方案

发酵过程中受到噬菌体污染了怎么处理才好，发酵罐感染了噬菌体怎么办？如何预防发酵罐或发酵过程中菌株感染噬菌体，有何切实可行的措施保证发酵避免噬菌体感染？带着问题我们搜寻了相关科学资料及实践经验，本文给出了发酵罐感染噬菌体的整体控制解决方案。

噬菌体是一类病毒，原指细菌病毒，近年来发现真菌、藻类都有噬菌体。（bacteriophage)噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、藻类、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。在生产中见到的噬菌体为蝌蚪形，直径约0.1um，其形态在显微镜下看不见，通过电子显微镜放大9×104倍后才能看见。

一、噬菌体的主要特征：

1.1专一的寄生性。噬菌体只能在专一的宿主细胞中生长繁殖，只能在活的、处于繁殖阶段的细胞中生长繁殖，不能脱离宿生而自行生长繁殖。如果不同菌株的亲缘关系比较近，那么此菌株也是会感染的，特别是针对长期生产同一产品的发酵工厂要特别注意，在换新菌株之前必须了解其背景。 

1.2不耐热性。游离的噬菌体在45℃条件下10min就可使其失活。 

1.3不耐药性。直接在噬菌体上喷洒1%新洁尔灭、75%酒精、1%双氧水、5%的甲醛等都可使其失活。

二、发酵感染噬菌体的一般出现的现象：

2.1发酵液光密度开始上升，而后下降。但有时也不上升，当把1%的噬菌体人为的接入罐中，光密度始终处于最低位 

2.2 pH逐渐上升，一般升到7.5，不再下降 3.3耗糖、氨缓慢或停止 3.4 OD回升 

2.3泡沫大、料液略黏 

2.4镜检时发现菌体减少，发胖，革兰氏染色后呈现红色碎片。严重时，可出现拉丝或网状，或呈鱼刺状，几乎看不到完整菌体。 

2.5用含有噬菌体的发酵液点在平板上能看到噬菌斑

三、噬菌体感染原因分析

3.1原料或IPTG受到了噬菌体的污染，菌株存在溶原性；

3.2发酵车间环境里噬菌体随空气进入发酵罐污染，虽然发酵罐有空气过滤器，但是如果环境空气存在噬菌体，空气过滤器是无法完全过滤拦截的，从空气过滤原理得知只能拦截一部分的噬菌体。实践证明，用过滤器的洗脱液经电镜观察，可以看到噬菌体的存在。

3.3罐体、管道清洗消毒不彻底，或时间久了存在管道顽固性生物膜给予的再次污染，温度、药物固然能灭活噬菌体，可是总有概率存活，并不是说达到一定的灭活温度就一定能把全部杀灭，空气加热也不尽其然。

3.4车间管理的疏忽大意，认为发酵只是发酵车间的事情与其他无关，其实预防噬菌体必须人人参与，提高意识，各部门配合且长期坚持下去。

诺福引领行业微生物控制，对噬菌体感染预防与控制进行了深入探讨，帮助了许多发酵企业解决了发酵罐感染噬菌体再次发生的问题，采用了国外较为先进的预防控制手段，领航行业技术前沿。

四、预防控制措施

4.1活菌体的排放是噬菌体发生发展的首要条件，故如何控制活菌体的排放成为噬菌体预防的关键所在。 

4.2每次上罐前对发酵罐进行空气试漏处理，防止由于设备原因造成话菌的4.3在接完种后，必须对残余种子液、接种瓶、种子罐及其连接管道附件等用蒸汽或药物消毒（推荐使用诺福进口杀菌产品，无毒无残留，医学科学院无毒验证，适用于设备内部灭菌），没经过灭活处理的种子液不得排入污水池。

4.4在发酵过程中，需要知道细菌的生长情况，要求定时取样对发酵液进行检测分析。取样最好在无风的条件下进行，取样口下方需设一个装有碱液（pH≥11）的容器，除了加盖取样瓶中的料液外，其余料液必须全部进入该碱容器，切勿喷洒或直接进入下水道。取完样后，要用消毒水对取样者的手、取样瓶、装碱容器和以取样品为中心的上下左右1m的空间进行立体的喷洒；取样瓶需装在盛有消毒水的容器中直到化验室。

4.5如果在活菌的控制上做得比较好了，但仍避免不了有微量的活菌外泄，那就通过切断噬菌体与发酵液的接触来预防噬菌体的污染。 

4.6提高吸风口高度，离地面每提高10m，空气中的含菌量可减少一个数量级。故吸风口高度越高越好，建议最低高度需超过发酵车间楼顶高度10m。

4.7加强环境消毒。车间内部使用诺福无气味杀菌剂（1:50稀释）对所有地面角落或空间进行喷洒，定期做环境空气药物熏蒸（干雾过氧化氢熏蒸可以代替甲醛熏蒸，效果好且无残留、无毒害），必要时也可以对发酵罐体及管道做熏蒸处理。每天早晚一次对车间地沟用高效消毒剂（如诺福）彻底消毒，保持地沟内清洁无积水。车间周围用ClO2、漂白粉每天喷洒2次。

4.8加强普查力度，定期（3天1次）对车间内部和车间周围环境中的杂菌含量进行普查统计，重点部位要求每天普查，对测得不合格的区域进行重点消毒，并且分析杂菌的来源。每月1次选择有代表性的样品灭活后用电镜复检。

五、噬菌体感染后处理

5.1当发酵罐上出现噬菌体的典型现象后，一般说来是车间周围环境污染的相当厉害了。此时切忌不要多上罐，因为罐上得越多，周围环境污染更厉害。最好是减产或停产一个星期。立刻做环境大消毒，快速的干雾过氧化氢熏蒸处理。

5.2发酵罐如果在20h感染噬菌体，那么立即加热到70℃维持10min后转到另外一个空消好的罐中，进行补种后重新发酵。如果在20h后感染的话，能产多少酸就让它产多少酸，如果不产酸的话就120℃，30min处理，排入污水池。

5.3感染噬菌体后的发酵罐及其相关联的系统都要经过处理： 

5.3.1发酵罐要经过空消121℃，30min→诺福杀菌2h→4%碱水100℃，4h→空消121℃，30min处理  

5.3.2所有与罐体直接相连的阀门拆下来肢解后用诺福杀菌水浸泡4h，然后组装好试压（0.8MPa的压缩空气）不漏后待用。 

5.3.3物料管道用干雾过氧化氢熏蒸2h，然后用清水清洗干净备用。 

5.3.4移种管道用干雾过氧化氢熏蒸2h，煮罐后的碱水通过移种管道排出，再用蒸汽消毒1h，要求每个排污阀都要微开，确保有水或汽排出。  

5.3.5把补料罐先清空，补料管道用干雾过氧化氢熏蒸2h，煮罐后的碱水通过移种管道排出，再用蒸汽消毒1h，要求每个排污阀都要微开，确保有水或汽排出。  

5.3.6放料管道用诺福杀菌剂按照比例（1:100）稀释浸泡管道2h，后排放。

5.3.7空气总管用干雾过氧化氢熏蒸2h，要求每个支路都要消到，再用蒸汽冲刷5分钟，最后用空气吹干。  

5.2.8配料槽储料槽等用诺福杀菌剂稀释后浸泡处理2h。 

5.2.9取样瓶取样篮等用诺福杀菌水浸泡。

诺福从比利时引进的高效生态型杀菌剂，打破了消毒的药物残留和二次污染问题，不但高效灭菌的同时而且还快速无残留型，经过国际ISO认证，国家权威机构检测合格，欧盟、日韩、亚非地区广泛使用的健康生态杀菌产品，特请了国家军事医学科学院检验了产品的无毒性实属无毒级别（国内唯一经过无毒检验的消毒产品），符合欧盟、WHO的GMP规范及FDA认证检查的消毒产品。

诺福的主要功效成份：食品级过氧化氢和胶质银离子。这两种成份作用的机理是：都能穿透和破坏微生物的细胞壁和细胞膜，进入细胞内部使其关键性功能成分（例如：DNA和酶）坏死，从而导致细胞死亡。

（食品级）过氧化氢是一种强氧化剂，释放的氧分子（初生态氧）将微生物的酶系统氧化。

胶质银离子妨碍细菌(酶)的基本的新陈代谢功能或影响他们的隔膜结构(微量活动)。

这两种成份都针对同一个目标，共同提高其性能(潜在的共同协作) 。无论是食品级过氧化氢还是胶质银离子，对病原菌细胞内所有成分的破坏都是不可逆转的，这就保证了杀菌的彻底性，同时更重要的是，由于这种独特的机理也保证了病原菌不会产生耐药性。

特点：

1、完全环保，完全生物可分解，对人、畜无害，无腐蚀性，无残留。

2、无色，无气味，无味道，不起沫，完全溶于水。

3、 见效快，作用时间长，效果明显，能完全杀死有害菌及病毒。

4、 应用弹性大：在低浓度时，依然有显著效果，在高达95摄氏度时仍然能起作用。

5、 具有超强的杀菌能力，集：杀菌控菌，消毒，除藻、除生物膜等多项功能于一体。能够解决任何细菌超标等问题，同市场上类似的产品相比，诺福杀菌剂更关键就是不会使细菌产生抗药性和耐药性。

诺福杀菌产品及干雾过氧化氢灭菌技术，请咨询：钟（经理）

Tel: 18128842053

QQ:2038182670 传真：0759-27447596